Introducción - lo que el cielo nos dice sobre la luz

La luz del sol aparece ligeramente amarilla por la mañana, idealmente un cielo azul al mediodía y se convierte en un hermoso rojo al atardecer. Esto describe perfectamente la distribución espectral de la luz, porque la luz consiste en varios colores con diferentes longitudes de onda. Las partículas y moléculas de la atmósfera dispersan la luz dependiendo de su tamaño. Las partículas más grandes como gotas de agua o cristales de hielo reflejan la luz y aparecen blancas. Las partículas más pequeñas producen luz dispersa y, por ejemplo, el color azul con una longitud de onda corta se dispersa más que la luz roja. Es por eso que el cielo aparece azul al mediodía, pero se convierte en rojo (longitud de onda más larga para el camino más largo de la luz) al atardecer.

Dicho esto, el comportamiento espectral de la luz puede utilizarse perfectamente para identificar colores y partículas. Eso es lo que hacen los sensores optek. El haz de luz de una fuente de luz definida pasa a través de una muestra y los detectores miden la luz emitida, por ejemplo, directamente a 0° o la luz dispersa en ángulos de 11° o 90°. El resultado es siempre la intensidad de la luz que pasa a través de una muestra. Con una calibración del sistema, utilizando estándares definidos (por ejemplo, filtros ópticos o estándares de turbidez), este resultado puede utilizarse para el análisis cualitativo y cuantitativo. La técnica de medición utilizada y las longitudes de onda seleccionadas constituyen los diferentes métodos de análisis.

Ley de Lambert-Beer

Una fuente de luz monocromática, por ejemplo, UV/VIS con la intensidad I0 pasa una solución diluida de una sustancia química específica del grosor d y da como resultado una intensidad I. La luz que pasa a través de la solución da a la (kommt hier nichts mehr?)

que disminuye exponencialmente con el aumento de la concentración (c) de la solución y con el grosor (d) de la cubeta:

Después de la adaptación obtenemos la "Ley de Lambert-Beer":

  • Io: Intensidad del haz de luz antes de la solución
  • I : Intensidad del haz de luz después de pasar la solución con grosor d
  • d : grosor d, o trayectoria del haz óptico (cm)
  • c : concentración de la sustancia absorbente en mol l-1.
  • ε : coeficiente de extinción molar a una longitud de onda específica para esta sustancia en l mol-1 cm-1.
  • E : extinción

En el caso ideal (ε) se realiza bajo condiciones de medición controladas (temperatura, disolvente, pH, etc.) dependiendo de la sustancia absorbente y de la longitud de onda (λ). Es una constante y no está influenciada por (c), listada en varias tablas para muchos productos químicos. Si se conoce la longitud del camino óptico (d) y la sustancia química (al igual que ε), la concentración desconocida (c) de una sustancia puede determinarse midiendo la extinción (E) a una longitud de onda específica:

Las siguientes figuras (1 y 2) visualizan los dos efectos sobre la Ley de Lambert-Beer:

Figura 1: Efectos de la transmisión de la luz, basados en la concentración de la muestra

Figura 2: Efectos de la transmisión de la luz, basados en la longitud del paso óptico

¿Qué se detecta cuando la luz pasa a través de una muestra?

En general, se pueden obtener dos resultados principales: el valor para la luz absorbida o para la luz transmitida.

La absorción de la luz, al pasar a través de una muestra, depende principalmente de la composición/estructura de la muestra y de la frecuencia de la luz (longitud de onda). Según la ley de Lambert-Beer, la intensidad de la luz que pasa a través de la muestra es proporcional al coeficiente de absorción y a la longitud del paso óptico (grosor de la muestra).

Si la muestra está absorbiendo la mayor parte de la luz, la precisión de la detección de trazas de productos químicos está empeorando, ya que la curva de absorción es más plana y los pequeños cambios no pueden detectarse de forma fiable. En este caso, una dilución de la muestra o una reducción de la longitud del paso óptico (grosor de la muestra) pueden ayudar a obtener valores de absorción más altos y resultados más precisos.

En el otro extremo de la escala de absorción, demasiada luz que pasa a través de la muestra también puede causar resultados poco fiables. Entonces un paso óptico más grande (grosor) puede ayudar a incrementar la absorción a niveles, donde el detector puede manejar mejor la cantidad de luz.

Figura 3: correlación entre la absorción (extinción) y la transmisión de la luz

Figura 4: parte del espectro de las ondas electromagnéticas.

La energía de la fuente de luz puede ser caracterizada por la longitud de onda. Cuanto más pequeña es la longitud de onda, más energía llega con las ondas electromagnéticas a la muestra y o bien excita a los electrones a niveles de energía más altos, o bien fuerza a partes de la molécula a oscilar y doblarse. Los sensores ópticos de optek utilizan rangos de longitud de onda de UV, VIS o NIR en varias configuraciones, para un rendimiento óptimo en mediciones ópticas.

Espectro de una muestra en el rango UV-VIS

Cuando una muestra con sustancias químicas se coloca en una fuente de luz de la energía, por ejemplo, de 200 a 700 nm de longitud de onda, las moléculas absorben cierta luz a longitudes de onda específicas. Como se muestra arriba, este tipo de espectro puede ser el resultado. Depende de la característica de la sustancia química para identificar un área de longitud de onda, donde las formas / picos en los espectros pueden ser utilizados para analizar, por ejemplo, el color, la concentración, los cambios estructurales (por ejemplo, por cambios en el pH) o la turbidez. La detección de la luz que atraviesa la muestra puede realizarse en varias direcciones. La técnica más común es la medición de la transmisión de la luz (o la absorción recíproca). El ángulo de detección es de 0°.

Figura 5: ejemplo de un espectro UV-VIS típico.

En la biotecnología, la longitud de onda de 280 nm se usa a menudo para bajas concentraciones para poder caracterizar el estado de agrupación de proteínas. Sin embargo, este pico a 280 nm excede rápidamente el rango de medición máximo a concentraciones más altas y también pierde las estructuras de pico. Por lo tanto, las concentraciones más altas se miden a> 300 nm en el flanco máximo, donde nuevamente se pueden resolver las estructuras máximas para su identificación.

Figura 6: Sensor AF46 de optek para cubrir concentraciones altas y bajas de proteína con 2 longitudes de onda.